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质粒拯救的主要原理

2024-07-30 12:13:17 编辑:join 浏览量:577

质粒拯救的主要原理

利用合适的限制性内切酶消化含有T-DNA插入的基因组DNA,直接用连接酶对消化产物连接环化,然后用高效的电击转化方法将连接产物转化大肠杆菌,通过抗性筛选获得阳性克隆,测序分析即可得到T-DNA的侧翼序列。质粒拯救技术的应用和载体的自身条件有很大的关系,首先要选用合适的载体,用于提供拯救质粒在转化宿主细胞中的复制起点和阳性克隆筛选基因,其次选用合适的核酸内切酶切基因组DNA,环化后得到一个只含有目的片段和抗性筛选基因的微笑质粒即拯救质粒

标签:质粒,拯救,原理

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